许多单羟基或多羟基甾体在生理学和药学方面具有重要的生理活性。一些多羟基甾体的3位配糖衍生物与心肌的强心配糖受体有强烈的相互作用[1～3]。而14α-羟基-雄甾烷-4-烯-3,6,17-三酮能抑制芳构化酶的活性,减少人类胎盘中雌激素的生成,降低子宫肌瘤的生成几率[4]。有人曾经用ThamnostylumpiriformeATCC8992和Mucorgriseocya
nusATCC1207a2种菌种对4-孕甾-3,20-二酮(1)转化得到14β-羟基-孕甾-3,20-二酮(2)及7β,14β二羟基-孕甾-3,20-二酮(3)[4]。作者利用总枝状毛霉(Macorracemosns,本实验室筛选)对化合物1进行生物转化,得到了化合物2和3,报道如下。
1　材料与方法
1.1　主要试剂与仪器　
①试剂:4-孕甾-3,20-二酮(湖南正驰药业股份有限公司),琼脂(SanlandInternationnalInc);蛋白胨和酵母膏(生化试剂,北京奥博星生物技术责任有限公司);无水葡萄糖(分析纯,汕头市西陇化工厂);磷酸二氢钾(分析纯,汕头金砂化工厂);薄层层析和柱层析硅胶G(青岛海洋化学试剂公司);其余试剂均为分析纯,天津化工三厂生产。
②仪器:WC-1型显微熔点仪(温度计均未校正);BIO-RAD公司FTS-40型红外分光光度计(KBr压片);瑞士BrukerDPX-400型超导核磁共振仪;HZQ-Q全温振荡器;HVE-50高压消毒柜;Leica普通光学显微镜;ClassⅡA/B3Bio logicalSafetyCabinet,SPX-250B型生化培养箱。Bruker-Esquire3000离子阱液相色谱质谱仪。
1.2　微生物的保存　
  总枝状毛霉以蛋白胨、葡萄糖、磷酸二氢钾、酵母膏和15g/L琼脂为培养基,27℃培养生长,在4℃下保藏,每次转化使用前都作次级新鲜培养。1.3　实验步骤及方法　
  微生物的转化:在10个500mm厄伦美厄烧瓶中分别加入100ml灭过菌的蛋白胨、葡萄糖、磷酸二氢钾和酵母膏的培养基,把总枝状毛霉从琼脂斜面培养基上接种到烧瓶中,于27℃下在振荡器中(150r/min)孵化培养2d,把底物1溶于丙酮中加入到烧瓶中,继续培养5d。把发酵液过滤去菌丝体,用乙酸乙酯充分萃取,在真空旋转蒸发仪蒸干,再以CHCl3/CH3OH(体积比8:1)为洗脱剂过硅胶柱得到产品化合物2和化合物3(图1)。

2　结果与讨论　
   过硅胶柱后得到化合物2和化合物3。化合物2熔点:177.2～179.0℃;IR(KBr)v:3479cm-1,2949cm-1,2869cm-1,1696cm-1,1650cm-1,1455cm-1,1358cm-1,1234cm-1,1206cm-1,1183cm-1,1144cm-1,1059cm-1,876cm-1;1HNMR(DMSO-d6,400MHz)δ:5.74(H-4),3.23J=8.64J=18.64(H-17),0.79(H-18),1.21(H-19),2.13(H-21);MS(ESI)m/z(M+Na)+:352.7。化合物3熔点:227.8～229.0℃;IR(KBr)v:3472cm-1,3412cm-1,2946cm-1,2888cm-1,1678cm-1,1628cm-1,1415cm-1,1355cm-1,1283cm-1,1200cm-1,1144cm-1,1058cm-1,876cm-1;1HNMR(DMSO-d6,400MHz)δ:5.58(H-4),4.11(H-7),3.08(H-17),0.64(H-18),1.14(H-19),2.04(H-21);MS(ESI)m/z(M+K)+:382.7。所得化合物均通过熔点、红外、核磁和质谱确定结构,证实化合物2、3分别为14β-羟基-孕甾-3,20-二酮和7β,14β二羟基-孕甾-3,20-二酮,与文献报道一致[4]。作者利用微生物转化法合成了甾体化合物4-孕甾-3,20-二酮的羟基化衍生物,具有潜在的医药应用价值,可以对其进行进一步化学改造。