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转让重组人源溶菌酶技术项目

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最后更新: 2016-06-01 13:38
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产品详细说明
 人源溶菌酶项目在国际和国内的技术优势已十分明显,主要表现在以下几个方面:

 

          1、基因水平--源头创新,本项目的技术优势首先体现在国际上率先发现重组溶菌酶基因序列,得到了高效表达的工程菌株,获得了国际PCT专利;该专利是Homo sapiens lysozyme(LYZ)编码的mRNA序列,并且根据毕赤酵母密码子的偏好性,设计了成熟蛋白基因编码序列,其序列为本公司专利序列。利用专利序列构建重组表达质粒FHX02-LYZ,然后重组质粒电转化毕赤酵母,通过转化子的筛选,得到高表达的人源溶菌酶基因工程菌”,在国际上居于领先地位。

 

2、发酵水平—工艺创新:本项目用Plackett-Burman 设计筛选重要因素,并首次应用响应曲面设计方法(Response Surface Methodology,RSM),采用多元二次回归方程来拟合因素与响应值之间的函数关系,通过对回归方程的分析来寻求最优工艺参数通过Plackett-Burman design的结果,确定对响应值有重要影响的因子后,采用Box-Behnken design,对其因子进行进一步优化,每个因素取3 水平。对实验数据进行二次回归拟合,得到的数学模型如下:

 

 

Y = β0 + ΣβiXi + ΣβijXiXj + ΣβiiXi2

其中,Y 为响应值,β0 为常数项,βi 为因素影响系数,βij 为因素间交互效应系数,βii 为因素的二阶影响系数。该方程反映了因素和响应值间的相互关系.

通过统计学的分析可以对期望的响应值进行预测。我们研究了诱导温度和诱导时间交互作用对酶活的影响,诱导温度和装液量交互作用对酶活的影响,诱导时间和装液量交互作用对酶活的影响,结果见下图.通过寻求最优工艺参数,我们在50升的发酵中,人源溶菌酶表达量为4g/升,为国际最高水平。

 

3、纯化水平—技术创新:为取得高表达的蛋白,本项目在发酵方法上进行了优化设计,建立了用复合型阳离子交换介质分离纯化发酵液中溶菌酶的新工艺。发酵液经离心、过滤处理后无需稀释可直接上柱纯化,经一步纯化目的蛋白即达到电泳纯,HPLC检测终产品为单一峰。整个工艺周期短、收率高,易于线性放大至生产规模酶活性。

本公司目前通过中试研究获得的重组人源溶菌酶冻干粉,纯度:> 99%,活性:≥ 170,000 U/mg,含量:100 mg/瓶。


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