转让重组人源溶菌酶技术项目

 人源溶菌酶项目在国际和国内的技术优势已十分明显，主要表现在以下几个方面：

 

          1、基因水平--源头创新，本项目的技术优势首先体现在国际上率先发现重组溶菌酶基因序列，得到了高效表达的工程菌株，获得了国际PCT专利；该专利是Homo sapiens lysozyme(LYZ)编码的mRNA序列，并且根据毕赤酵母密码子的偏好性，设计了成熟蛋白基因编码序列，其序列为本公司专利序列。利用专利序列构建重组表达质粒FHX02-LYZ，然后重组质粒电转化毕赤酵母，通过转化子的筛选，得到高表达的人源溶菌酶基因工程菌”，在国际上居于领先地位。

 

2、发酵水平—工艺创新：本项目用Plackett-Burman 设计筛选重要因素，并首次应用响应曲面设计方法(Response Surface Methodology，RSM)，采用多元二次回归方程来拟合因素与响应值之间的函数关系，通过对回归方程的分析来寻求最优工艺参数通过Plackett-Burman design的结果，确定对响应值有重要影响的因子后，采用Box-Behnken design，对其因子进行进一步优化，每个因素取3 水平。对实验数据进行二次回归拟合，得到的数学模型如下：

 

 

Y = β0 + ΣβiXi + ΣβijXiXj + ΣβiiXi2

其中，Y 为响应值，β0 为常数项，βi 为因素影响系数，βij 为因素间交互效应系数，βii 为因素的二阶影响系数。该方程反映了因素和响应值间的相互关系.

通过统计学的分析可以对期望的响应值进行预测。我们研究了诱导温度和诱导时间交互作用对酶活的影响，诱导温度和装液量交互作用对酶活的影响，诱导时间和装液量交互作用对酶活的影响，结果见下图．通过寻求最优工艺参数，我们在50升的发酵中，人源溶菌酶表达量为4g/升，为国际最高水平。

 

3、纯化水平—技术创新：为取得高表达的蛋白，本项目在发酵方法上进行了优化设计，建立了用复合型阳离子交换介质分离纯化发酵液中溶菌酶的新工艺。发酵液经离心、过滤处理后无需稀释可直接上柱纯化，经一步纯化目的蛋白即达到电泳纯，HPLC检测终产品为单一峰。整个工艺周期短、收率高，易于线性放大至生产规模酶活性。

本公司目前通过中试研究获得的重组人源溶菌酶冻干粉，纯度：> 99%，活性：≥ 170,000 U/mg，含量：100 mg/瓶。