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信号肽优化在枯草芽孢杆菌体系中对脂肪酶Lips分泌表达的影响

日期:2015-10-13     浏览:253    下载:0     体积:667.07K     评论:0    


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 信号肽优化在枯草芽孢杆菌体系中对脂肪酶Lips分泌表达的影响*
  周勇徐刚杨立荣吴坚平**
(浙江大学化学工程与生物工程学院杭州310027
摘要枯草芽袍杆菌具有良好的安全性和优异的外分泌能力,是目前常用的脂肪酶异源分泌表
达体系。在枯草体系中如何提高脂肪酶分泌量是目前的研究热点。该体系中信号肽与目的基因
不匹配和目标蛋白总表达量不高是导致脂肪酶Lips分泌表达效果较差的重要原因。针对这些问
题,依据信号肽结构特征的不同(正电荷与疏水氨基酸个数的差异)对枯草芽袍杆菌体系中Sec
和Tat这两个主要分泌途径的信号肽进行了筛选,结果显示Tat途径中的phoD信号肽分泌效果明
显优于其他信号肽。在此基拙上,通过替换使用诱导型表达载体、突变优化phoD信号肽,并考察
了表达条件的影响,显著提高了脂肪酶Lips的分泌表达量,发酵液中转醋酶活达到62. 07U/L,占
总酶活的62. 30%,较原始分泌表达体系的分泌量提高了13. 7倍。
关键词 脂肪酶 信号肽 筛选 分泌表达
中图分类号p814
 
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