丹毒丝菌SpaA基因免疫保护区的克隆及其在毕赤酵母中的表达

蒋志琼，钟泽民，谭博敏，余希尧，黄毓茂

（华南农业大学兽医学院，广东广州５１０６４２）
 

摘要：
【目的】以毕赤酵母ＰｉｃｈｉａｐａｓｔｏｒｉｓＸ３３为宿主表达猪丹毒丝菌ＥｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅＳｐａＡ基因氨基端的免疫保护区蛋白．【方法】以采集于广东某猪场的猪丹毒丝菌为模板，根据ＮＣＢＩ中已发表的Ｓｐａ基因ｃＤＮＡ序列设计１对引物，通过ＰＣＲ扩增得到ＳｐａＡＮ，并将其连接到表达载体ｐＰＩＣＺαＣ上，得到重组表达质粒ｐＰＩＣＺαＣＳｐａＡＮ；

用ＳａｃＩ酶将重组表达质粒ｐＰＩＣＺαＣＳｐａＡＮ线性化后电转化入毕赤酵母Ｘ３３，经含博来霉素ＺｅｎｃｉｎＴＭ抗性的ＹＰＤＳ平板筛选和ＰＣＲ鉴定的阳性转化子，用含不同浓度博来霉素抗性的ＹＰＤＳ平板筛选出高拷贝子并进行甲醇诱导培养，分别于诱导４８、７２、９６ｈ后离心收集上清液，立即做ＳＤＳＰＡＧＥ，并进行ＳＤＳＰＡＧＥ及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ试验．
【结果和结论】成功克隆并表达了ＳｐａＡＮ基因，构建了重组表达质粒ｐＰＩＣＺαＣＳｐａＡＮ，并以毕赤酵母Ｘ３３为宿主成功表达了猪丹毒丝菌ＳｐａＡ基因氨基端的免疫保护区蛋白．丹毒丝菌ＳｐａＡＮ作为免疫保护区在酵母宿主中得以成功表达．
 

关键词：丹毒丝菌；ＳｐａＡ基因；毕赤酵母；克隆和表达；亚单位疫苗