一株特异腐质霉纤维素酶高产突变株的鉴定分析

 陈 媛１ꎬ２ ꎬ 李金阳２ ꎬ 张宇宏２ ꎬ 刘 波２ ꎬ 张志伟１∗ ꎬ 徐欣欣２∗ ꎬ 张 伟２ １.山西农业大学林学院ꎬ 山西 太谷 ０３０８０１ꎻ ２.中国农业科学院生物技术研究所ꎬ 北京 １０００８１ 摘 要: 高温真菌特异腐质霉(Ｈｕｍｉｃｏｌａ ｉｎｓｏｌｅｎｓ)具有强大的纤维素酶分泌和纤维素降解能力ꎬ因此在生物质能源、饲料 和纺织工业等领域中具有良好的应用前景ꎮ 在特异腐质霉 Ｔ￣ＤＮＡ 随机插入突变体库中筛选得到一株纤维素酶高产菌 株 Ｔ５３ꎮ 在纤维素诱导培养条件下ꎬ突变株 Ｔ５３ 发酵上清中的滤纸酶活力、内切 β￣１ꎬ４ 葡聚糖酶活力、纤维二糖水解酶活 力、β￣葡萄糖苷酶活力以及木聚糖酶活力较野生型菌株分别提高了 ４０％、６０％、９０％、１０％、６０％ꎮ 蛋白电泳结果显示ꎬＴ５３ 菌株的胞外总蛋白特别是纤维素酶与半纤维素酶的分泌量较野生型菌株有显著提高ꎮ ＴＡＩＬ￣ＰＣＲ 克隆鉴定了 Ｔ５３ 菌株 中的 Ｔ￣ＤＮＡ 插入位点侧翼序列ꎬ结果表明 Ｔ￣ＤＮＡ 插入位点位于一个可能的 Ｃ２Ｈ２ 型锌指蛋白类转录因子编码基因的上 游启动子区域ꎮ 这为揭示突变株 Ｔ５３ 中纤维素酶的高产分子机制奠定了重要基础ꎬ有助于理解特异腐质霉中纤维素酶 的表达调控机制ꎬ为特异腐质霉纤维素酶高产工程菌的构建奠定了理论和技术基础ꎮ 关键词: 特异腐质霉ꎻ纤维素酶ꎻＴ￣ＤＮＡ 随机插入ꎻ锌指蛋白