黄 燕1，2，3 孙益荣1，2，3 吴 敬1，2，3 宿玲恰1，2，3''
（1江南大学食品科学与技术国家重点实验室 无锡 214122）
（2江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室 无锡 214122）
（3江南大学 教育部食品安全国际合作联合实验室 无锡 214122）
摘要 在采用前期已构建的重组菌 E.coliBL21（DE3）／pET20b（+）hic进行高密度发酵制备角质酶时发现，在高诱导强度发酵时，菌体浓度下降明显。同时，通过测定纯化重组角质酶的磷脂水解活性，考察验证了重组酶对宿主细胞的损伤作用。重组酶的磷脂酰乙醇胺活性为 9.8U／mg（NPB水解比活力为 1047.6U／mg），在卵黄平板出现了明显的反应圈现象。在此基础上尝试了高菌体浓度结合高诱导强度的发酵策略，以进一步提高重组酶在 3L罐中的表达水平。优化后的
最佳条件及结果为：OD600为 75时，恒速流加 0.8g／（L·h）的乳糖溶液，发酵 24h后，酶活达到最大值 4788.0U／ml，约为摇瓶发酵酶活的 28倍，与 OD600为 50时、流加 0.2g／（L·h）进行诱导的发酵策略（酶活 2233.0U／ml）相比，提高幅度约为 114.0%，发酵时间缩短 40.0%。
关键词 Humicolainsolens 角质酶 磷脂酶活性 高密度发酵
