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共表达PDI1、MDH1和HAC1基因对重组毕赤酵母分泌表达葡糖氧化酶的影响

日期:2019-11-25     浏览:196    下载:0     体积:1.07M     评论:0    


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 共表达 PDI1、MDH1和 HAC1基因对重组毕赤 酵母分泌表达葡糖氧化酶的影响

 张文玉 魏东升 钱江潮 (华东理工大学生物反应器国家重点实验室 上海 200237)

摘要
葡糖氧化酶(GOD)可催化葡萄糖生成过氧化氢和葡萄糖酸,在工业上被广泛应用。在构 建的一株整合多拷贝 GOD基因且含有 HAC1表达单元的重组毕赤酵母 G/GMH1的基础上,共表 达分子伴侣二硫键异构酶基因 PDI1和苹果酸脱氢酶基因 MDH1,考察 PDI1、MDH1基因与 HAC1 共表达后对 GOD分泌表达的影响。这些基因共表达后对重组菌的生长无明显影响。PDI1和 MDH1分别与 HAC1共表达后,重组菌 G/GMH1PDI1和 G/GMH1MDH1的胞外 GOD产量达到 11731.9U/gDCW和 11047.6U/gDCW,比出发菌提高了 17.3%和 10.4%,前者达到了目前所报 道摇瓶培养的最高单位菌体酶活水平。而三基因共表达重组菌 G/GMH1PDI1MDH1的 GOD产 量略有下降。在所构建的菌株中,GOD基因的转录水平仅在 G/GMH1PDI1MDH1中略有提高, 与酶产量的提高无直接关系。与出发菌相比,共表达基因的转录水平在新构建的菌中有不同程 度的升高,说明这些基因被成功转录。PDI1和 MDH1基因转录在 G/GMH1PDI1和 G/GMH1 MDH1中分别被上调,可能与 GOD产量提高有关。虽然 GOD、HAC1、PDI1和 MDH1基因在 G/ GMH1PDI1MDH1中均被上调,但并未促进酶产量的提高。

关键词 重组毕赤酵母 葡糖氧化酶 HAC1基因 PDI1基因 MDH1基因
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