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美达霉素产生菌中立体专一性酮基还原酶基因 med-ORF12 的表达

日期:2019-11-28     浏览:296    下载:0     体积:1.47M     评论:0    


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孙锐1,2 ,刘明1,2 ,宫彩霞1,2 ,王蔚1,2 ,曾爱兵3 ,李爱英1,2*
1 华中师范大学生命科学学院,武汉 430079
2 华中师范大学农药与化学生物学教育部重点实验室,武汉 430079
3 温州医学院生命科学学院,温州 325035
摘要:美达霉素是链霉菌产生的具有强抗肿瘤活性的芳香聚酮类抗生素,其砒喃环并内酯结构对于其抗癌活性非常重要。位于美达霉素生物合成基因簇中的基因 med-ORF12 编码立体专一性酮基还原酶,可能参与美达霉素的砒喃环并内酯结构中手性中心(C3 S) 的形成,但在美达霉素产生菌中的功能和表达还未曾研究。
 
【目的和方法】为了研究 med-ORF12 在野生菌中的表达情况以及与美达霉素生物合成的关系,本文采用了原核表达、抗体制备、免疫杂交等技术方法对这个基因展开了体内表达研究。
【结果】首先利用 pET 载体建立了 med-ORF12 的原核表达系统,在优化诱导表达条件的基础上获得了可溶性目的蛋白,制备了相应的多抗血清;然后利用多抗血清对美达霉素产生菌中的基因 med-ORF12 的表达情况进行了检测,表明在美达霉素产生菌中参与次生代谢的 med-ORF12 在稳定期大量表达,同时伴随美达霉素的大量积累。
【结论】这些结果表明在美达霉素产生菌中,基因 med-ORF12 参与次生代谢,其表达与美达霉素生物合成有一定相关性。
关键词: 链霉菌,次生代谢,美达霉素,立体专一性酮基还原酶
 
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