一、原料细胞预处理（精子细胞富集）
1. 原料采集：新鲜ink-id="link-1784005929578-0.14353083287778934">鲑鱼精巢（milt）冷链0–4℃转运，剔除结缔组织、淤血；-20℃冷冻保藏。
2. 低温匀浆破碎：加入Tris-NaCl缓冲液（pH7.2–7.6，含EDTA螯合金属离子防DNA降解），高压均质/ink-id="link-1784005929579-0.9229234215372102">超声破碎，释放完整精子细胞悬液。
3. 细胞富集离心：3000–5000 r/min低温离心10–15 min，弃上清脂类杂质，收集精子细胞沉淀。
二、细胞裂解（破膜释放基因组DNA）
目标：彻底打碎细胞膜、核膜，释放DNA，同时初步去除组蛋白/ink-id="link-1784005929578-0.019069129809741847">鱼精蛋白。
两种工业方案二选一：
方案A 洗涤剂温和裂解（医美注射级首选）
细胞沉淀重悬裂解缓冲液，加入Triton X-100/X-114非离子表面活性剂+低浓度SDS，4℃低速搅拌1–2 h；脂类、膜蛋白形成有机相分层，水相留存核酸。
方案B 胍盐强裂解（高收率粗提）
加入ink-id="link-1784005929579-0.04656323933374695">盐酸胍裂解液，高盐破坏蛋白-DNA结合复合物，室温充分吹打裂解；
配套加入蛋白酶K复合酶，45–50℃孵育1–1.5 h，降解组蛋白、鱼精蛋白、杂蛋白（过敏原核心去除步骤）。
裂解后10000 r/min离心，取含DNA上清液，丢弃细胞碎片沉淀。
三、深度脱蛋白除杂（关键安全步骤）
蛋白残留会引发过敏、炎症，注射级必须多重脱蛋白：
1. 盐析纯化：上清加高浓度NaCl，蛋白变性析出，高速离心弃沉淀；
2. 相分离除脂内毒素（专利工艺）：Triton X-114体系4℃混匀，升温26℃分相，下层有机相带走内毒素、脂蛋白，仅保留上层核酸水相；
3. RNase处理：加入核糖核酸酶降解RNA，避免RNA杂质干扰纯度；
4. 活性炭脱色除热源：50℃改性活性炭搅拌吸附色素、脂多糖内毒素，精密过滤去除炭渣。
四、完整DNA沉淀回收
1. 水相调节乙酸钠pH至5.2，加入2.5倍体积-20℃无水乙醇/ink-id="link-1784005929580-0.9608500089181284">异丙醇，低温静置30 min，长链DNA析出白色絮状沉淀；
2. 低温离心收集DNA沉淀；70%冷乙醇洗涤2–3次，去除盐分、有机溶剂残留；
3. 真空低温干燥，得到完整高分子鲑鱼DNA粗品。
六成品成型（冻干/液体原液）
1. 浓缩液透析置换为生理盐水/磷酸盐缓冲液，调节pH中性；
2. 预冻后真空冷冻干燥（低温不破坏核酸结构），得到白色粉末PDRN（DNA钠盐形式，水溶性最好）；
3. 分装无菌密封，避光低温储存
