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纤维素是自然界中最丰富的可再生资源，但绝大部分无法被充分利用。用纤维素酶把纤维素水解成葡萄糖，是现代酶工程中最令人鼓舞的新进展之一⋯ 。把含纤维的自然资源及纤维废料加以充分利用，转化成糖类作为食品工业和发酵工业的原料或制成优质饲料，具有深远的现实意义。国内外科研工作者已先后筛选和培育了许多产纤维素酶的菌种，其中木霉属菌株产生的纤维素酶活力较高。由于其粗酶制剂中含有较高活力的C，酶和C 酶 ，因而成为当前生产上应用较多的菌种。但与淀粉酶和蛋白酶相比，其生产规模小，酶的活力也较低，酶解效率不高。当前的研究攻关主要集中以下两个方面：一是通过菌种筛选、基因克隆等手段来提高酶的产量和活力， 以降低产酶成本，改进酶的回收利用；二是改变天然纤维素酶的结构，以提高其对酶作用的敏感性 。笔者曾于2001年从福建香菇烂筒及其地下部土壤中分离到19株真菌，并于2002年对其进行摇瓶发酵，测定其酶活性，初步筛选到一株酶活比生产菌株康氏木霉更高的菌株c本文报道其筛选过程及初步试验结果。
1 材料与方法
1．1 供试菌株供试菌株系笔者2001年从福建香菇烂筒及其地下部土壤中分离获得到的19株真菌，其代号分别为C真3、C放1、C放2、J1、E瓣、S4、H真6、E细J1白、K真2、I2、E细1、B放1、土木、C真l1、C放2l、N真1、E缈和M辨。以康氏木霉(菌株号为R，购自上海工业微生物所，福建农林大学食科学院食品微生物实验室保藏)为参比菌株。
1．2 培养基
1．2．1 斜面菌种(母种)培养基选用马铃薯蔗糖琼脂培养基，简称PDA。
1．2．2 粗酶发酵培养基
按参考文献[4]略加修改： (NH4)2HPO4 2 g、ZnSO4 ·7H2 O 4.4mg、K2HPO4 0 2 g、M nSO4·4H2O 1．0 mg、KH2PO4 0．8 g、柠檬酸铁5 mg、CaCI：20 mg、酵母膏1．0 g、MgSO .7H2O 0.9 g、蛋白胨2 g、维生素B1100 、水1000ml、稻草粉3 g。每个500ml三角瓶分装上述培养液150 ml，121 c【=灭菌30分钟。1．3 粗酶液的制备将各菌株的试管菌种(PDA母种)接入100 ml无菌水中摇匀，按6％ 接入粗酶发酵液体培养基中，置摇床振荡培养7天(29~C、160转／分钟)，然后用滤纸过滤，得粗酶滤液(待测液)。
1．4 滤纸酶活的测定按参考文献[5]，酶活力以540 nm的吸光度(A)表示。
1．5 CMC酶活的测定按参考文献[6]，酶活力以540 nm的吸光度(A)表示。
1．6 B一葡萄糖苷酶活的测定按参考文献[6]，酶活力以540 nm的吸光度(A)表示。
1．7 滤纸崩溃的测定取15 mm×150 mm试管1支，加入醋酸缓冲液1 ml，粗酶液4 ml及1cm×3 cm新华滤纸一张，摇匀，使滤纸全部浸入溶液中，然后将试管置于40℃恒温水浴中保温2小时，取出观察滤纸崩溃情况，结果以“+” 的多少表示滤纸崩溃程度 J。
2 结果与分析
2．1 19个供试菌株与对比菌株R的滤纸酶活比较分别测定19个菌株发酵液的滤纸酶活，结果显示，它们的吸光度(A值)分别为：c龇0．032、I：0．039、l自0．032、K真2 0．030、E细31 0．030、E细1 0．028、C真30．034、C放1 0．023、B放1 0．022、N真1 0．022、M细40．022、E娜0．021、土木0．020、H宴6 0．020、R0．019、E雏0．016、S4 0．016、C翼11 0．016、C鲫0．012、J，0．011，CK (空白，对照)为0．010。结果说明，C真3、E细 Jl白、K真2、I2、E细1、C放2具有较高的滤纸酶活，可参加下一步的复选试验。
2．2 7个菌株纤维素酶的活性比较 已知纤维素酶的作用方式：C。酶是使天然纤维素晶体分链，起一个分离和水合作用，从而使天然纤维素裂解成为直链纤维素；而c 酶虽不能水解天然纤维素，但能水解直链纤维素的13一l，4一葡萄糖苷键生成纤维二糖，纤维二糖再经13一葡萄糖苷酶水解成为葡萄糖。前人研究认为，纤维素的降解关键是滤纸酶活的高低，再结合13一葡萄糖苷酶活，而CMC酶活只作参考 。为此，挑选上述试验中滤纸酶活性较高的7个菌株进行进一步试验，主要测定其滤纸酶活、CMC酶活和13一葡萄糖苷酶活。各菌株均设3个处理，取其平均值(表1)。
结果显示，滤纸酶活：Cl3：I2>Jl白>E细l>Eml>K真2：Cm；CMC酶活：Cl3>E细3l>I2>K真2>Cm >E细I>Jl白；13一葡萄糖苷酶活：Jl白>K真2>cl3>Cm >Eml>I2>E细I。综合上述结果，可选出c真3、Jm和I2三个较高产酶菌株。
2．3 3个较高产酶菌株与参试对比菌株R的酶活性比较对上述试验选出的3个菌株和参试对比菌株R(康氏木霉)所产生的纤维素酶，分别进行滤纸崩溃测定和CMC酶活、13一葡萄糖苷酶测定。各菌株均设3个处理，取其平均值(表2)。从表2可以看出，滤纸崩溃能力以cl3最高，其CMC酶活与参试对比菌株相似，但13一葡萄糖苷酶活稍小于康氏木霉。综合上述测定结果与前人经验 ，可初步筛选出一株产纤维酶活比生产菌株康氏木霉更高的菌株c ，建议进行进一步试验。
2．4 优化条件下Cl3菌株的纤维素酶活性经初步优化试验，发现30~C、摇瓶时间7天、pH 5．5时，Cl3的酶活较高。为此，进行了一次验证试验。试验结果(表3)表明，在以上优化条件下，Cl3菌株产生的纤维素酶的活性有较大的提高。建议对cl3进行进一步的优化试验， 以探明最适的产纤维素酶条件，提高其酶活。
3 小结与讨论
3．1 通过对19个菌株发酵液的滤纸酶活、CMC酶活、13一葡萄糖苷酶活进行测定，初步筛选出产纤维素酶活力较高的cl3菌株。初步试验表明，在30~C、摇瓶时间7天、pH 5．5时，cl3菌株产生的纤维素酶的活性有较大提高。建议对Cl3进行进一步的优化试验，以探明其最适的产酶条件，或对其进行进一步的诱变，以提高其酶活性应用于生产实践。
3．2 本试验条件下，纤维素酶的活性测定可能存在一定的误差。造成误差的原因是多方面的，滤纸的物理结构、试验的重复次数以及分光光度计的稳定性等均有影响。据有关资料分析，酶活测定的重复次数达10次时，误差一般不超过10％ 。此外，由于试验时仅考虑进行对比筛选，没有同时测定葡萄糖浓度标准曲线，这也是本研究的不足。在以后的试验中，应进一步改进。
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